组织学绪论

四、组织化学和细胞化学

1．基本原理：是在组织切片或被检材料上，加一定试剂，使它与组织或细胞中待检物质发生化学反应成为有色沉淀物，可应用光镜观察。若为重金属沉淀，可以用电镜观察，称电镜组织化学。
2．用途：这种方法可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类、核酸与某些金属元素等。如进一步应用分光光度计等测定标本中沉淀物的强度，则能较精确地进行定量研究。
1、．糖类显示法
最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖方法是过碘酸—雪夫反应pas反应、。基本原理是：糖被强氧化剂过碘酸hi0₄、氧化后，形成2-醛基；后者与schiff试剂中的无色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色反应产物，pas反应阳性部位即表示多糖的存在部位。
2、．酶类显示
细胞内含有多种酶，每一种酶可催化一定的化学反应。酶的显示法是通过显示酶的活性来表明酶的存在，而不是酶的本身。将具有酶活性的组织放人含有一定底物的溶液中孵育，底物经酶的作用形成初级反应产物，它再与某种捕捉剂相反应，形成显微镜下可视性沉淀，如欲显示细胞内酸性磷酸酶，先将切片放入含有酶底物常用6-甘油酸磷酸钠、的溶液ph 5.0、中孵育，底物经酶的作用，水解并释放出磷酸；用捕捉剂硝酸铅与磷酸反应，形成微细的磷酸铅沉淀，此时，可在电镜下检出；如再应用硫化铵处理时，磷酸铅被置换成硫化铅沉淀，可在光镜下见到。
3、．脂类显示
脂类物质包括脂肪与类脂。标本可用甲醛固定或冷冻切片，用油红、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑b、尼罗蓝等脂溶性染料染色；亦可用锇酸固定兼染色，脂类呈黑色。
4．核酸显示法 显示核酸的传统方法为feulgen反应。切片先经稀盐酸处理后，使细胞内dna水解，打开dna分子中脱氧核糖核酸和嘌呤碱之间的连接键，使其释放出醛基，再用schiff试剂处理，形成紫红色反应产物。如用甲基绿—派若宁反应，可同时显示细胞内的dna和rna，甲基绿与细胞内的dna结合呈蓝绿色，派若宁与核仁结合呈红色。

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